俺是维通利华大中华地区话事人，关于实验动物的一切都可以找我哈！

萌新想找一个会做CRISPR的大佬

有人会细菌同源重组吗，有偿求指导

敲除非模式种所用的亲本是怎么确定纯合的啊？

有谁能帮忙构建病原革兰氏阴性细菌的突变株？像假单胞菌、弧菌、沙门菌、克雷伯菌、伯克氏菌……等等，谢谢

CRISPR-U™是源井生物自主研发的基因编辑技术（基于CRISPR / Cas9技术），CRISPR-U™技术比普通CRISPR/Cas9技术的基因切割效率更高，同时可以大幅度提升同源重组效率，轻松实现细胞和动物水平的基因敲除（KO）、基因点突变（PM）和基因敲入（KI）。利用CRISPR-U™的技术优势，源井生物已成功在超过100种细胞系上实现基因编辑。 CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，从而造成靶位点DNA双链断裂，

为理解与人类疾病相关的遗传因素，人类基因组计划（HGP）和从患病个体获得的DNA序列数据为此提供了前所未有的机会。癌症中的突变可能改变许多分子活动，而其中一个分子活动就是蛋白质磷酸化。当它被改变时，可能会导致整个系统的受损和信号转导的失调。 迄今为止，已知有3000多种人类基因的改变与疾病相关。单基因疾病，例如亨廷顿氏病，囊性纤维化，地中海贫血和镰状细胞性贫血，都是由单基因突变引起的。而癌症和糖尿病等多因素疾病

CRISPR是一种革命性的基因组编辑技术，是一项有可能会改变世界的技术。虽然这还是一个相对较新的发现，但很快，CRISPR将成为用于生物学研究标准的实验工具。CRISPR最广泛应用之一是敲除特定基因以了解该基因的功能。实验通常需要同时转染大量细胞，形成具有不同Indel的基因编辑细胞混合克隆，也被称为KO（敲除）pool。CRISPR介导产生的KO pool取代了较传统的基于RNAi的方法，正逐渐成为许多研究细胞系基因功能的研究人员的首选方法。KO pool混合了野

CRISPR-U™基因编辑细胞系原理 CRISPR-U™是源井生物自主研发的基因编辑技术（基于CRISPR / Cas9技术），CRISPR-U™技术比普通CRISPR/Cas9技术的基因切割效率更高，同时可以大幅度提升同源重组效率，轻松实现细胞和动物水平的基因敲除（KO）、基因点突变（PM）和基因敲入（KI）。利用CRISPR-U™的技术优势，源井生物已成功在超过100种细胞系上实现基因编辑。 CRISPR/Cas9系统的原理是利用gRNA特异性识别靶序列，并引导Cas9核酸内切酶对靶序列的PAM上游进行切割，

活动时间：2020年12月12日-2021年1月31日 活动内容：活动期内，凡是订购基因敲除细胞和病毒服务的客户， 金额满1万元，即可享受立减1000元优惠。 广州源井生物科技有限公司（简称“源井生物”http://www.ubigene.com） 是海外归国人员和生物科技领域行业精英联合创建的高科技企业。源井生物自主研发的CRISPR-U™和CRISPR-B™技术可以将传统基因编辑效率提升10-30倍，是基因编辑细胞，动物和微生物的突破性专利技术。务实，高效，坦诚和守信是源井生物的企

酸碱裂解提鼠尾DNA怎么做

基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9条件性基因敲入鼠的鉴定，今天我们就开始学习CRISPR/Cas9基因敲入鼠的鉴定。 验证F1代阳性鼠打靶是否正确 引物设计 为了验证外源DNA序列是否正确插入，两边同源臂是否打靶正确，使用F1/R1验证5'arm端，F2/R2

基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定，今天我们就开始学习CRISPR/Cas9条件性基因敲除鼠的鉴定。 一、验证F1代flox鼠打靶是否正确 1. 引物设计 F1/R1验证5'arm打靶是否正确，F2/R2验证3'arm打靶是否正确，F5/R5、F6/R6验证两

基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳比对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了PCR胶浓度、电泳电压及时间的选择，今天我们就开始学习CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鉴定。 两条引物进行基因型鉴定 引物设计 将引物设计在敲除区域的两端，即F1和R1引物，通过条带大小判断基因型。 预期片段大

从别人那里拿到毛果杨Cas9三突突变体，想先鉴定一下这个是不是确实都把三个基因敲掉了，请问各位大神知不知道该怎么鉴定呢？

求问大佬GNASf/f（上标）是啥意思。

求教 在写一篇基因敲除小鼠鉴定方法比较的论文 如果鉴定一千只小鼠基因型并直接使用公司裂解液裂解大概需要多少钱

有大神能普及一下条件性基因敲除鼠的原理吗？

IRES的优缺点： 优点：IRES被放置于两个ORF之间的时候，可以同时表达这两个ORF。由于两个ORF分别有自己的起始密码子和终止密码子，所以会 翻译两个完全独立的、没有经过修饰的蛋白。 缺点：IRES的存在有时候会影响mRNA的结构，同时由于IRES和mRNA的5‘CAP对核糖体/或翻译起始复合物的结合力不同，IRES后面的 ORF翻译蛋白的水平有可能与IRES前面的ORF蛋白水平不一致。有的时候前面的ORF表达很好，但后面的ORF表达水平不高；有的时候后面的ORF 和/或 IRES

条件性基因敲除主要是通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP和 FLP-frt来实现的。想达到的目的是只有某个组织或者某个时间内，该基因条件性地敲除不表达，而在其他组织和时间内都是正常表达的。如果得到F1代杂合子小鼠后，直接和组织特异性Cre小鼠交配，那么就实现了特异的组织中该基因的敲除，其它组织中该基因仍含有Loxp和Neo，不能精确地模拟野生型，Neo的引进也可能引起一些表型，以干扰实验结果。

基因敲除相关信息

质粒DNA经转染进入细胞后，仅有一部分被转运到细胞核内进行转录并最终输出mRNA到细胞质进行蛋白合成。转入基因的表达通常可以在1－4天内可以检测到。一周后，由于大部分外源DNA会被核酸酶降解或随细胞分裂而稀释，因此，也就检测不到其存在了。转染可以分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染（transient transfection）指的是转染的核酸不整合到染色体上，结果是短暂的高水平表达，可在24—96小时内检测表达效果，表达水平与位置无关，不会受到周围

一、TALEN TALE (Transcription Activator-Like Effector) 是由植物致病细菌Xanthomonas分泌的一类具有转录激活功能的蛋白，该种蛋白通过其内部保守的重复氨基酸序列（即DNA结合域）与植物宿主基因启动子区的相应核苷酸序列发生特异性结合，并激活基因表达。 TALE的DNA结合域由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成，每个模块一般包含33~35个氨基酸（aa），其第12,13位氨基酸种类可变且决定了TALE与DNA结合的特异性。因此称这种重复可变的双氨基酸序列为RVD (Repeat V

TALEN基因组编辑系统可用于生产人干细胞疾病模型

小鼠胚胎干细胞由小鼠囊胚内细胞团分离得到，在胚胎发育过程中，内细胞团的多能性只停留于短暂的瞬间，之后即随着胚胎发育迅速分化。而通过体外培养获得的胚胎干细胞，其多能性却可以通过培养体系中添加的信号刺激因子而长久维持。自1981年小鼠胚胎干细胞首次建立起，至今小鼠胚胎干细胞多能性及自我更新的维持机制已经得到了较为深入了解。 最早建立的两套小鼠胚胎干细胞培养体系中，Evans /Kaufman使用了丝裂霉素C处理的STO细胞作为饲养

基因打靶技术是建立在小鼠胚胎干细胞的培养及干细胞囊胚注射的基础上的。 获得的嵌合鼠的生殖系嵌合率对于基因打靶的时效性是非常重要的。 在此讨论一下影响嵌合率的因素，为有效提高基因打靶效率寻找提升的空间及努力的方向。

2倍体积的无水乙醇沉淀DNA需要阳离子的存在，如加入1/1O体积的NaAC,而且沉淀的盐少，易挥发除去。缺点是总体积较大。需在-20放置很长时间，30分钟-1小时。 1倍体积的异丙醇可以选择性的沉淀DNA和大分子rRNA和mRNA，但是对5SRNA，tRNA以及多糖等不产生沉淀,不需要放置很长时间，其缺点是易使盐类DNA共沉淀，而且异丙醇难以挥发除去。

一般得到基因敲除小鼠后，首先要做的就是小鼠基因型的鉴定，一般采用PCR的方式。 获得的基因敲除小鼠种类不一样，所以采用的引物也不一样，比如我们做的全基因敲除小鼠，用neo抗性基因取代了小鼠本身的一段基因序列，这时我们一般在取代基因的位置选一对引物（引物1），在neo前选一个正向引物，反向引物在neo上选取（引物2），那么通过2次PCR的方式，野生型小鼠只能用引物1扩增出单一条带，而全敲除小鼠只能用引物2扩增出相应大小的片段，

求解三个问题 一、如何利用体细胞克隆技术制备生长激素（CH）基因敲除猪？ 二、如何来证明你的确制备成功？ 三、试想一下，单基因敲除与双基因敲除各自产生的表型效应

这种设计最初通过在内含子中插入一个基因破坏盒（含有一个带有剪切受体的报告基因和一个抗性基因，两个元件之间有一个loxP位点，两元件两测各有一个Frt位点，如图所示）来达到敲除的目的。除了基因破坏盒，在目的基因敲除的外显子两侧各插入两个loxP位点。因此得到的小鼠是目的基因敲除同时敲进报告基因与抗性基因的小鼠。当此小鼠与表达Cre的小鼠交配时，可获得目的基因敲除同时敲进报告基因的小鼠。而当此小鼠与Flip小鼠交配时，可修复

现在动物实验越来越多，根据实验需要，通过检测实验动物微生物标准，可将实验动物洁净级别分为四级： 一级 普通动物（CV），系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和积少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病，在实验动物饲养和繁殖时，要采取一定的措施，应保证其用于测试的结果具有反应的重现性（即无论不同的操作人员，在不同的时间，用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验，都能获得几

p53基因是作用最为广泛、效果最为明显、被公认度最高的抑癌基因。在许多发达国家，p53基因敲除小鼠已经成为药物致癌加速实验的标准模型动物。药物致癌鉴定的实验平台是开发新药，评估药物毒理的一个重要环节； 目 前我国很多实验室所用的p53基因敲除小鼠多来自国外实验室，仅限于科研交流，不能用来进行商业性的药理毒理及致癌实验，同时国家法定检验部门不能用来出 法定检定报告。并且这些小鼠由于在不同实验室里与不同遗传背景的小鼠

如何制备双基因敲除小鼠？已经有A基因转基因小鼠？如何实现再转B基因或者实现B基因的敲除？ 已经有A基因转基因小鼠？如何实现再转B基因或者实现B基因的敲除？ 老师，针对这个问题，您需要告诉我们您现在的转基因鼠是哪种品系，转的是什么基因，用的是什么样的载体，在什么位点表达？同时也需要告诉我们您要实现的基因敲除和转基因是什么基因，希望插入在哪个位点，怎样表达。如果两者不在同一条染色体上，我们可以帮您制作B基因的敲除

最近II型成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)的研究进展为改善基因组编辑方法带来了希望。然而在模式动物例如斑马鱼中，此系统的应用性及有效性还鲜有研究。北京大学分子医学研究所的席建忠实验室于3月26日在Cell Research杂志中发表文章证明RNA介导的Cas9核酸酶不论在哺乳动物细胞还是斑马鱼胚胎中都可以以一种简单迅速的方式有效地促进基因组编辑。当Cas/gRNA分别在斑马鱼体内胚胎中用于对etsrp, gata4和gata5进行定点打靶时，均可发现35%的定点

apoE是星形胶质细胞分泌的载脂蛋白，与Aβ之间固有的亲和力表明它和神经元受体介导的Aβ吸收有关。为了揭示apoE参与神经细胞Aβ的积累，以及阻断apoE/Aβ 之间的相互作用是否会减少神经细胞Aβ的形成，纽约大学医学院的研究者们采用了无触点神经元-星形细胞的共同培养体系。此体系中，合成的Aβ多肽被加入到了用Aβ12-28P处理或不作处理的介质中，Aβ12-28P是一种无毒的与apoE/Aβ结合的多肽拮抗物。与神经元单独培养相比，神经细胞Aβ在共同培养体系中

《基因打靶技术》这本书中两个loxp之间的距离在1.5-3.5kb之间，敲除效率在99%。但是这也只是经验值，目前很多研究都可以敲除更长的片段，但是如果增加了loxp之间的距离，一方面CRE酶的活力会下降，另一方面在做ES细胞重组的时候，同时整合两个loxp site的概率也有一定的下降。

对特定基因的基因敲除小鼠进行表型分析，已经改变了我们对体内基因功能的了解。然而，基因敲除小鼠的产生，仍然是一个耗时且昂贵的过程。转录激活子样效应器核酸酶可以在基因组中的特定位点高效诱导突变，因此在小鼠受精卵中由Talen介导的诱导突变可以作为常规小鼠敲除的新选择。然而至今还没有人利用talen对小鼠进行基因敲除。在1月9日发表的nature biotechnology杂志中，韩国延世大学的Han-Woong Lee等人证明他们利用talent技术分别获得了孕酮免疫

TALEN (transcription activator-like (TAL) effector nucleases)靶向基因敲除技术是一种崭新的分子生物学工具，现已应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类研究对象。研究发现，Xanthomonas TAL蛋白核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有较恒定的对应关系。研究者们利用来自Xanthomonas TAL的序列模块，构建针对任意核酸靶序列的重组核酸酶，在特异的位点打断目标基因，敲除该基因功能。成功解决了常规的ZFN方法不能识别任意目标基因序列，以及

很多的朋友想自己设计条件性基因敲除小鼠，或是想理解一下这方面的内容。这里做一个简单的介绍。希望对你有帮助。 条件性基因敲除小鼠 的设计利用了Cre/LoxP或Flipe/Frt原理。它们都是位点特异性重组酶系统。这里以Cre/LoxP系统为例。比如在待敲除的一段目标DNA 序列的两端各放置一个loxP序列，得到flox（flanked by loxP)小鼠。将flox小鼠与带有细胞特异性表达Cre的小鼠交配繁殖，以获得在特定细胞里把目标基因敲除掉的小鼠，即条件性基因敲除小鼠。此

2012年10月26日 科学家可能发现了为什么治疗帕金森病的标准疗法经常只在有限时间内是有效的。 在一项新的研究中，哈佛大学医学院神经生物学教授Bernardo Sabatini领导的一个研究小组利用模式动物来研究纹状体(striatum)---参与运动和学习的大脑区域---中的多巴胺能神经元。这些神经元能够释放多巴胺。多巴胺是一种允许我们行走、说话和甚至敲打键盘的神经递质。当这些细胞死亡时，就像帕金森病患者体内发生的那样，他们逐渐丧失了运动能力。当前

SOE-PCR的原理是什么呀？

答：（1）先配制成10×母液，分别于试剂瓶中常温保存： 100mM NaOH ； 1mM EDTAPH 8.0; （2）两种母液混合并至各自浓度均稀释了10倍，配制成使用液（现用现配），每个鼠耳样品加300ul裂解液 （3）95℃ 加热10分钟 （4）降至室温，直接吸取裂解液上清4ul作为模板，进行PCR检测 （5）鼠耳DNA溶液在-20℃保存

优势：价格便宜、技术含量低、操作容易、制备周期短。 劣势：转基因有整合位点以及拷贝数目不确定。后期筛选过程十分复杂。筛选到稳定并且一致的fouder需要时间过长（通常需要2年左右的时间)等。Rosa26定点转基因具有拷贝数目确定（单拷贝），插入位点确定（ROSA26定点转基因），制作完成之后可以马上做实验等优势。

是23个氨基酸组成的短肽，它可以连接前后两个蛋白，共同转录和翻译表达蛋白，最后表达出蛋白后，在22个氨基酸处出现断裂，前22个氨基酸连接在前边的蛋白上，后边一个氨基酸连接在后边的蛋白上，这样可以保证前后蛋白的表达水平一致。